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實驗動物給藥和采血方法

時間:2015-08-29來源:本站作者:玉研儀器

實驗研究中,經常要采集實驗動物的血液進行常規檢查或某些生物化學分析,故必須掌握血液的正確采集、分離和保存的操作技術。

采血方法的選擇,主要決定于實驗的目的所需血量以及動物種類。凡用血量較少的檢驗如紅、白細胞計數、血紅蛋白的測定,血液涂片以及酶活性微量分析法 等,可刺破組織取毛細血管的血。當需血量較多時可作靜脈采血。靜脈采血時,若需反復多次,應自遠離心臟端開始,以免發生栓塞而影響整條靜脈。例如,研究毒 物對肺功能的影響、血液酸堿平衡、水鹽代謝紊亂,需要比較動、動脈血氧分壓、二氧化碳分壓和血液pH值以及K+、Na+、CI-離子濃度,必須采取動脈血液。

采血時要注意:⑴采血場所有充足的光線;室溫夏季最好保持在25-28℃,冬季,15-20℃為宜;⑵采血用具有采用部位一般需要進行消毒;⑶采血 用的注射器和試管必須保持清潔干燥;⑷若需抗凝全血,在注射器或試管內需預先加入抗凝劑?,F將采用血方法按動物和部位分別加以介紹。

不同動物采血部位與采血量的關系可參考表11-7。

表11-7 不同動物采血部位與采血量的關系

采血量 采血部位 動物品種
取少量血 尾靜脈
耳靜脈
眼底靜脈叢
舌下靜脈
腹壁靜脈
冠、腳蹼皮下靜脈
大鼠、小鼠
兔、狗、貓、豬、山羊、綿羊
兔、大鼠、小鼠

青蛙、蟾蜍
雞、鴨、鵝
取中量血 后肢外側皮下小隱靜脈
前肢內側皮下頭靜脈
耳中央動脈
頸靜脈
心臟
斷頭
翼下靜脈
頸動脈
狗、猴、貓
狗、猴、貓

狗、貓、兔
豚鼠、大鼠、小鼠
大鼠、小鼠
雞、鴨、鴿、鵝
雞、鴨、鴿、鵝
取大量血 股動脈、頸動脈
心臟
頸靜脈
摘眼球
狗、猴、貓、兔
狗、猴、貓、兔
馬、牛、山羊、綿羊
大鼠、小鼠

常用實驗動物的最大安全采血量與最小的致死采用血量,見表11-8。
表11-8 常用實驗動物的最大安全采血量與最小致死采血量

動物品種 最大安全采血量(ml) 最小致死采血量(ml)
小 鼠 0.2 0.3
大 鼠 1 2
豚 鼠 5 10
10 40
狼 狗 100 500
獵 狗 50 200
15 60

(一)小鼠、大鼠采血法

1.割(剪)尾采血

當所需血量很少時采用本法。固定動物并露出鼠尾。將尾部毛剪去后消毒,然后浸在45℃左右的溫水中數分鐘,使尾部血管充盈。再將尾擦干,用銳器(刀 或剪刀)割去尾尖0.3-0.5cm,讓血液自由滴入盛器或用血紅蛋白吸管吸取,采血結束,傷口消毒并壓迫止血。也可在尾部作一橫切口,割破尾動脈或靜 脈,收集血液的方法同上。每鼠一般可采血10余次以上。小鼠每次可取血0.1ml,大鼠0.3~0.5ml。

2.鼠尾刺血法

大鼠用血量不多時(僅做白細胞計數或血紅蛋白檢查),可采用本法。先將鼠尾用溫水擦拭,再用酒精消毒和擦拭,使鼠尾充血。用7號或8號注射針頭,刺 入鼠尾靜脈,拔出針頭時即有血滴出,一次可采集10~50mm3。如果長期反復取血,應先靠近鼠尾末端穿刺,以后再逐漸向近心端穿刺。

3.眼眶靜脈叢采血 采血者的左手拇食兩指從背部較緊地握住小鼠或大鼠的頸部(大鼠采血需帶上紗手套),應防止動物窒息。當取血時左手拇指及食指輕 輕壓迫動物的頸部兩側,使眶后靜脈叢充血。右手持續接7號針頭的1ml注射器或長頸(3~4cm)硬質玻璃滴管(毛細管內徑0.5-1.0mm),使采血 器與鼠面成45℃的夾角,由眼內角刺入,針頭斜面先向眼球,刺入后再轉180度使斜面對著眼眶后界。刺入濃度,小鼠約2~3mm,大鼠約4~5mm。當感 到有阻力時即停止推進,同時,將針退出約0.1-0.5mm,邊退邊抽。若穿刺適當血液能自然流入毛細管中,當得到所需的血量后,即除去加于頸部的壓力, 同時,將采血器拔出,以防止術后穿刺孔出血。

若技術熟練,用本法短期內可重復采血均無多大困難。左右兩眼輪換更好。體重20-25g的小鼠每次可采血0.2-0.3ml;體重200-300g大鼠每次可采血0.5-1.0ml,可適用于某些生物化學項目的檢驗。

4.斷頭取血

采血者的左手拇指和食指以背部較緊地握住大(?。┦蟮念i部皮膚,并作動物頭朝下傾的姿勢。右手用剪刀猛剪鼠頸,約1/2-4/5的頸部前剪斷,讓血自由滴入盛器。小鼠可采用約0.8~1.2ml;大鼠約5-10ml。

5.心臟采血

鼠類的心臟較小,且心率較快,心臟采血比較困難,故少用?;铙w采血方法與豚鼠相同。若做開胸一次死亡采血,先將動物作深麻醉,打開胸腔,暴露心臟,用針頭刺入右心室,吸取血液。小鼠約0.5-0.6ml;大鼠約0.8-1.2ml。

6.頸動靜脈采血

先將動物仰位固定,切開頸部皮膚,分離皮下結締組織,使頸靜脈充分暴露,可用注射器吸出血液。在氣管兩側分離出頸動脈,離心端結扎,向心端剪口將血滴入試管內。

7.腹主動脈采血

最好先將動物麻醉,仰臥固定在手術架上,從腹正中線皮膚切開腹腔,使腹主動脈清楚暴露。用注射器吸出血液,防止溶血?;蛴脽o齒鑷子剝離結締組織,夾住動脈近心端,用尖頭手術剪刀,剪斷動脈,使血液噴入盛器。

8.股動(靜)脈采血

先由助手握住動物,采血者左手拉直動物下肢,使靜脈充盈?;蛘咭圆珓訛橹笜?,右手用注射器刺入血管。體重15-20g 小鼠采血約0.2-0.8ml,大鼠約0.4-0.6ml。

(二)豚鼠采血法

1.耳緣剪口采血

將耳消毒后,用銳器(刀或刀片)割破耳緣,在切口邊緣涂抹20%檸檬酸鈉溶液,阻止血凝,則血可自切口自動流出,進入盛器。操作時,使耳充血效果較好。此法能采血0.5ml左右。

2.心臟采血

取血前應探明心臟搏動最強部位,通常在胸骨左緣的正中,選心跳最顯的部位作穿刺。針頭宜稍細長些,以免發生手術后穿刺孔出血,其操作手法詳見兔心臟 采血。因豚鼠身體較小,一般可不必將動物固定在解剖臺上,而可由助手握住前后肢進行采血即可。成年豚鼠每周采血應不超過10ml為宜。

3.肌動脈采血

將動脈仰位固定在手術臺上,剪去腹股溝區的毛,麻醉后,局部用碘酒消毒。切開長約2-3cm的皮膚,使股動脈暴露及分離。然后,用鑷子提起股動脈, 遠端結扎,近端用止血鉗夾住,在動脈中央剪一小孔,用無菌玻璃小導管或聚乙烯、聚四氟乙烯管插入,放開止血鉗,血液即導管口流出。一次可采血 10-20ml。

4.背中足靜脈取血

助手固定動物,將其右或左右膝關節伸直提到術者面前。術者將動物腳背面用酒精消毒,找出背中足靜脈后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿的注射針刺入靜脈。拔針后立即出血,呈半球狀隆起。采血后,用紗布或脫脂棉壓迫止血。反復采血時,兩后肢交替使用。

(三)兔采血法

1.耳靜脈采血

本法為最常用的取血法之一,常作多次反復取血用,因此,保護耳緣靜脈,防止發生栓塞特別重要。

將兔放入僅露出頭部及兩耳的固定盒中,或由助手以手扶住。選耳靜脈清晰的耳朵,將耳靜脈部位的毛拔去,用75%酒精局部消毒,待干。用手指輕輕摩擦 兔耳,使靜脈擴張,用連有5(1/2)號針頭的注射器在耳緣靜脈末端刺破血管待血液漏出取血或將針頭逆血流方向刺入耳緣靜脈取血,取血完畢用棉球壓迫止 血,此種采血法一次最多可采血5-10ml。

2.耳中央動脈采血

將兔置于兔固定筒內,在兔耳的中央有一條較粗、顏色較鮮紅的中央動脈,用左手固定兔耳,右手取注射器,在中央動脈的末端,沿著動脈平行地向心方向刺 入動脈,即可見動脈血進入針筒,取血完畢后注意止血。此法一次抽血可達15ml。但抽血時應注意,由于兔耳中央動脈容易發生痙攣性收縮,因此抽血前,必須 先讓兔耳充分充血,當動脈擴張,未發生痙攣性收縮之前立即進行抽血,如果等待時間過長,動脈經常會發生較長時間的痙攣性收縮。取血用的針頭一般用6號針 頭,不要太細。針刺部位從中央動脈末端開始。不要在近耳根部取血,因耳根部軟組織厚,血管位置略深,易刺透血管造成皮下出血。

3.心臟取血

將家兔仰臥固定,在第三肋間胸骨左緣3毫米處注射針垂直刺入心臟,血液隨即進入針管。注意事項有:⑴動作宜迅速,以縮短在心臟內的留針時間和防止血 液凝固;⑵如針頭已進入心臟但抽不出血時,應將針頭稍微后退一點。⑶在胸腔內針頭不應左右擺動以防止傷及心,肺、一次可取血20-25ml。

4.后肢脛部皮下靜脈取血

將兔仰臥固定于兔固定板上,或由一人將兔固定好。拔去脛部被毛,在脛部上端股部扎以橡皮管,則在脛部外側淺表皮下,可清楚見到皮下靜脈。用左手兩指 固定好靜脈,右手取帶有5(1/2)號針頭的注射器內皮下靜脈平行方向刺入血管,抽一下針栓,如血進入注射器,表示針頭已刺入血管,即可取血。一次可取 2~5ml。取完后必須用棉球壓迫取血部位止血,時間要略長些,因此處不易止血。如止血不妥,可造成皮下血腫,影響連續多次取血。

5.股靜脈、頸靜脈取血

先作股靜脈和頸靜脈暴露分離手術

⑴股靜脈取血 注射器平行于血管,從股靜脈下端向心方向刺入,徐徐抽動針栓即可取血。抽血完畢后要注意止血。股靜脈較易止血,用于紗布輕壓取血部位即可。若連續多次取血,取血部位宜盡量選擇靠離心端。

⑵外頸靜脈取血 注射器由近心端(距頸靜脈分支2-3厘米處)向頭側端順血管平等方向刺入,使注射針一直引深至頸靜脈分支叉處,即可取血。此處血管 較粗,很容易取血,取血量也較多,一次可取10ml以上。取血完畢,拔出針頭,用干紗布輕輕壓迫取血部位也易止血。兔急性實驗的靜脈取血,用此法較方便。

(四)狗、貓采血法

1.后肢外側小隱靜脈和前肢內側下頭靜脈采血

此法最常用,且方便。后肢外側小隱靜脈在后肢脛部下1/3的外側淺表的皮下,由前側方向后行走。抽血前,將狗固定在狗架上或使狗側臥,由助手將狗固 定好。將抽血部位的毛剪去,碘酒一酒精消毒皮膚。采血者左手拇指和食指握緊剪毛區上部,使下肢靜脈充盈,右手用連有6號或7號針頭的消毒器迅速穿刺入靜 脈,左手放松將針固定,以適當速度抽血(以無氣泡為宜)?;驅⒛z皮帶綁在狗股部,或由助手握緊股部,即可,若僅需少量血液,可以不用注射器抽取,只需用針 頭直接刺入靜脈,待血從針孔自然滴出,放入盛器或作涂片。

采集前肢內側皮下的頭靜脈血時,操作方法基本與上述相同。一只狗一般采10-20ml血并不困難。

2.股動脈采血

本法為采取狗動脈血最常用的方法。操作也較簡便。稍加以訓練的狗,在清醒狀態下將狗臥位固定于狗解剖臺上。伸展后肢向外伸直,暴露腹肥肉溝三角動脈 搏動的部位,剪去毛。用碘酒消毒。左手中指、食指探摸股動脈跳動部位,并固定好血管,右手取連有5(1/2)號針頭的注射器,針頭由動脈跳動處直接刺入血 管,若刺入動脈一般可見鮮紅血液流入注射器,有時還需微微轉動一下針頭或上下移動一下針頭,方見鮮血流入。有時,往往刺入靜脈,必須重抽之。待抽血完畢, 迅速拔出針頭,用干藥棉壓迫止血2~3分鐘。

3.心臟采血

本法最好在麻醉下進行,馴服的狗不麻醉也行。將固定在手術臺上,前肢向背側方向固定,暴露胸部,將左側第3-5肋間的被毛剪去,用碘酒-酒精消毒皮 膚。采血者用左手觸摸左側3-5肋間處,選擇心跳最顯處穿刺。一般選擇胸骨左緣外1cm第4肋間處。取連有6(1/2)號針頭的注射器,由上述部位進針, 并向動物背側方向垂直刺入心臟。采血者可隨針接觸心跳的感覺,隨時調整刺入方向和濃度,擺動的角度盡量小,避免損傷心肌過重,或造成胸腔大出血。當針頭正 確刺入心臟時,血即可進入抽射器,可抽取多量血液。

4.耳緣靜脈采血

本法宜取少量血液作血常規或微量酶活力檢查等。有訓練的狗不必綁嘴,剪去耳尖部短毛,即可見耳緣靜脈,手法基本與兔相同。

5.頸靜脈

狗不需麻醉,經訓練的狗不需固定,未經訓練的狗應予固定。取側臥位,剪去頸部被毛約10×3cm2范圍,用碘酒、酒精消毒皮膚。將狗頸部拉直,頭盡 量后抑。用左手拇指壓住頸靜脈入胸部位的皮膚。使頸靜脈怒張,右手取連有6(1/2)號針頭的注射器。針頭沿血管平行方向向心端刺往前血管。由于此靜脈在 皮下易滑動,針刺時除用左手固定好血管外,刺入要準確。取血后注意壓迫止血。采用此法一次可取較多量的血。

貓的采血法基本與狗相同。常采用前肢皮下頭靜脈、后肢的股靜脈、耳緣靜脈取血。需大量血液時可從頸靜脈取血。方法見前述。

(五)猴采血法

與人類的采血法相似,常用者有以下幾種:

1.毛細血管采血 需血量少時,可在猴拇指或足跟等處采血。采血方法與人的手指或耳垂處的采血法相同。

2.靜脈采血 最宜部位是后肢皮下靜脈及外頸靜脈。后肢皮下靜脈的取血法與狗相似。

用外頸靜脈采血時,把猴固定在猴臺上,側臥,頭部略低于臺面,助手固定猴的頭部與肩部。先剪去頸部的毛,用碘酒-酒精消毒,即可見位于上頜角與鎖骨中點之間的怒張的外頸靜脈。用左手拇指按住靜脈,右手持連6(1/2)號針頭的注射器,其它操作與人的靜脈取血同。

也可在肘窩、腕骨、手背及足背選靜脈采血。但這些靜脈更細、易滑動、穿刺難,血流出速度慢。

3.動脈采血 股動脈可觸及。取血量多時常被優先選用,手法與狗股動脈采血相似。此外,肱動脈與橈動脈也可用。

(六)羊的采血方法

常采用頸靜脈取血方法。也可在前后肢皮下靜脈取血。頸靜脈粗大,容易抽取,而且取血量較多,一般一次可抽取50-100ml。

將羊蹄捆縛,按倒在地,由助手用雙手握住羊下頜,向上固定住頭部。在頸部一側外緣剪毛約2寸范圍,碘酒、酒精消毒。用左手拇指按壓頸靜脈,使之怒 張,右手取連用粗針頭的注射器沿靜脈一側以39度傾斜由頭端向心方向刺入血管,然后緩緩抽血至所需量。取血完畢,拔出針頭,采血部位以酒精棉球壓迫片刻, 同時迅速將血液注入盛有玻璃珠的滅菌燒瓶內,振蕩數分鐘,脫去纖維蛋白,防止凝血,或將血液直接注入裝有凝劑的燒瓶內。

(七)雞、鴿、鴨的采血方法

雞和鴿常采用的取血方法,是從其翼根靜脈取血。如需抽取血時,可將動脈翅膀展開,露出腋窩,將羽毛拔去,即可見到明顯的翼根靜脈,此靜脈是由翼根進 入腋窩的一條較粗靜脈。有碘酒、酒精消毒皮膚。抽血時用左手拇指、食指壓迫此靜脈向心端,血管即怒張。右手取連有5(1/2)號針頭的注射器,針頭由翼根 向翅膀方向沿靜脈平行刺入血管內,即可抽血,一般一只成年動物可抽取10-20ml血液。也常采用右側頸靜脈取血。右側頸靜脈較左側粗,故用右側頸靜脈。 以食指和中指按住頭的一側,用酒精棉球消毒右側頸靜脈的部位。以拇指輕壓頸根部以使靜脈充血。右手持注射器刺入靜脈取血。常采用取血法還有爪靜脈取血和心 臟取血。在爪根部與爪中所見血管尖端之間切斷血管,以吸管或毛細胞直接取血。亦可將注射針刺入心臟內取血。

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